微生物實驗報告模板

學院：生命科學學院

專業：生物科學類

年級：20xx級

姓名：

學號：1007040085

20xx年XX月XX日

實驗十分離產澱粉酶的微生物

一、實驗目的

1、熟悉常用微生物培養基（牛肉膏蛋白腖培養基）的配製方法。

2、學習各種無菌操作技術，並用此技術進行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。

3、用平板劃線法和稀釋塗布平板發分離微生物。

4、認識為微生物存在的普遍性，體會無菌操作的重要性。

5、掌握分離產澱粉酶微生物的試驗方法和步驟，瞭解產澱粉酶的微生物種類及形態。

二、實驗原理

土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發現有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數量不同，一般土壤中細菌數量最多，其次為放線菌和黴菌。一般在較乾燥，偏鹼性、有機質豐富的土壤中放線苗數量較多；酵母菌在一般土壤中的數量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數量多些。本次實驗從土壤中分離產澱粉酶的微生物，應該取那些富含產澱粉酶的微生物的土樣。從複雜的微生物羣體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有

1、簡單單細胞挑取法

2、平板分離法和稀釋塗布平板法

此次實驗採取的是平板分離法和稀釋塗布平板法結合，該方法操作簡單，普遍用於微生物的分離與純化。其原理包括：

1)稀釋後的細胞懸液圖不在平板上可以分離得單個菌株

2)在適合於待分離微生物的生長條件（如營養、酸鹼度、温度與氧等）下培養微生物，或加入某種抑制劑造成只利於待分離微生物的生長，而抑制其他微生物生長的環境，從而淘汰一些不需要的微生物。

3)微生物在固體培養基上生長形成的單個菌落可以是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養。獲得單菌落的方法可通過稀釋塗布平板或平板劃線等方法完成。

以澱粉作為惟一碳源的培養基培養未分離細菌，能產澱粉酶的細菌能生長，且菌落周圍出現透明圈（澱粉不透明，被消化後變透明），則產澱粉酶微生物被分離出來。本實驗採用透明圈檢驗法檢測培養物中是否有產澱粉酶微生物的生長。

三、實驗儀器及試劑

1、器材：

培養皿、載玻片、蓋玻片、普通光學顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環、鑷子、恆温培養箱、高壓蒸汽滅菌鍋、、天平、濾紙、pH試紙等。

2、試劑：

配製牛肉膏蛋白腖培養基的原料（牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白腖）、澱粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。

3、土樣：

取自貴州大學農生樓后土壤10g，地下10cm左右。

四、實驗步驟：

1、配製牛肉膏蛋白腖培養基：

1）配製牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基400ml（用於11個平皿和7支試管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g

蛋白腖1%……………………………………4g

NaCl0.5%…………………………………..2g

瓊脂2%……………………………………..8g

澱粉0.5%........................................2g

pH……………………………………7.0~7.2

（2）無菌水的製備

分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞後用報紙包紮捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的'操作，滅菌備用。

（3）器皿的準備

將刻度吸管用報紙包紮，培養皿裝入專用滅菌杯分別放入高温滅菌箱滅菌備用。

2）倒11個平板和7支試管斜面，包紮，0.1Mp、121℃、滅菌30min.

2、製備土壤稀釋液：

稱取土樣10g，放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振盪搖勻10min使土和水充分混合，然後用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無菌操作），加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推分別製成製成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。

3、塗布培養：

0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為塗布平板培養的對象，將其分別塗布在3個牛肉膏蛋白腖培養基中，共6個培養基，標號，37°C温箱培養48h。

4、選取目的菌株：

兩天後對土壤溶液的微生物培養基進行觀察，並取兩個菌落形態完全一致的分散的單個菌落，對其中一個噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現透明圈，如果出現透明圈説明此菌株產澱粉酶，是目的菌株，記錄細菌明顯的性狀。