生物試劑方

生物試劑篇一：生物試劑配方

生物試劑配方

一，健那綠：1,）1%健那綠：0.5g+50ml生理鹽水

2）1/5000健那綠染液：取1%的健那綠1ml加入49ml生理鹽水=20ml健那綠+980mll生理鹽水

二，吡羅紅甲基綠：A液：1）甲基綠2g+98ml水

2）吡羅紅G5g+95ml水

3）取60ml甲基綠與20ml吡羅紅加入到160ml水，放入棕色瓶備用。

B液：1）乙酸鈉16.4g,加水至1000ml

2）乙酸12ml，加水至1000ml

3)乙酸鈉溶液300ml+稀乙酸200ml+500ml水

吡羅紅甲基綠試劑：A液200ml+B液800ml

三．牙籤消毒：KMno4溶液，取0.1g~0.5g高猛酸鉀溶於100蒸餾水中

四．生理鹽水：0.9%：取9g鹽溶於1000ml水中

五．30%蔗糖溶液：300g蔗糖加水至1000ml

六．1g龍膽紫溶於100ml水，稀釋到500ml，存於棕色瓶中。

七．斐林試劑：甲液：100g氫氧化鈉(NaOH)加水至1000ml

乙液：50gCuSO4加水至1000ml

蘇丹：1g乾粉加95%酒精至1000ml

雙縮脲：A液：同甲液B液：10gCuSO4加水至1000ml

八．澱粉酶：2%：20g酶+980ml水

澱粉3%：30g澱粉+970ml水

蔗糖3%：30g糖+970ml水

過氧化氫（H2O2）3%：100ml（30%H2O2）+900ml水

3.5%FeCl3：35g(Fecl3)+965ml水

15%HCL：202ml(37%HCL)加水至500ml

九．層析液：石油醚+丙酮+苯20:2:1=1000:100:50

生物試劑篇二：生物試劑配製標準操作流程

生物試劑配製標準化操作流程

1.目的

確保試劑配製準確、有效。

2.範圍

試劑研發部芯片組所用的生物試劑。

3.器材與試劑

3.1.器材

電子天平，稱量匙，稱量紙，移液槍，渦旋混合器，掌上離心機，磁力攪拌器，轉子，玻璃棒，1L容量瓶，50ml容量瓶，100ml容量瓶，10ml容量瓶，1L燒杯，100ml燒杯，10ml燒杯，100ml量筒，10ml量筒，0.2μm孔徑濾膜，1ml注射器，1.5ml離心管。3.2.試劑

EDC：1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimideHydrochloride，1-乙基-3-(3-甲基氨基丙基)碳化二亞胺，(191.7)，密封、乾燥、-20℃避光密閉保存。MES：2-(N-Morpholino)ethanesulfonicacid，2-(N-嗎啉代)乙磺酸，(213.2)，室温乾燥密閉保存。

Formamide：甲酰胺，(45.041)，4℃密閉保存。

10g/mlSalmonDNA：鮭魚精DNA，室温乾燥密閉保存。

SDS：dodecylsulfate，十二烷基硫酸鈉，(288)，室温乾燥密閉保存。1mol/LNaOH：氫氧化鈉，(40.01)，室温密閉乾燥保存。

檸檬酸三鈉·2H2O：Trisodiumcitrate，dihydrate，(294.1)，室温乾燥密閉保存。NaCl：氯化鈉，(58.44)，室温乾燥密閉保存。1mol/LHCl：鹽酸，(36.5)，室温密閉保存。

4.程序

(20mM，2×)配製：

4.1.1.配製0.1MMES母液

.在乾燥環境中用電子天平稱取1.21524gMES於乾淨的100ml燒杯中。.量取30ml蒸餾水溶解MES固體，加入數滴1mol/LNaOH調節pH至5.1。.把溶液轉移到已經檢查過的50ml容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉移到容量瓶中，輕輕搖動，用玻璃棒引流，加蒸餾水定容至50ml。

4.1.2.配製20mMMES

.於無菌操作枱內稀釋0.1MMES母液至20mM(2ml0.1M母液+8ml無菌水，即2×)，分裝至1.5ml離心管，全程無菌過濾，-20℃保存。

洗液配製：

×SSC(1L)洗液配製：

.在乾燥環境中用電子天平稱取175.3g(3M)NaCl和88.2g(0.3M)檸檬酸三鈉·2H2O於1L的燒杯中。

.量取800ml去離子水溶解NaCl與檸檬酸三鈉·2H2O，加入數滴1mol/LNaOH溶液調pH值至7.0。

.把溶液轉移到已經檢查過的1L容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉移到容量瓶中，輕輕搖動，用玻璃棒引流，加水定容至1L，分裝後高壓滅菌，室温密閉存放。%SDS(100ml)配製：

.在乾燥環境中用電子天平稱取10gSDS。.量取80ml去離子水加熱溶解10gSDS。

.待溶液冷卻至室温，加入數滴1mol/LHCl調pH至7.2。

.把溶液轉移到已經檢查過的100ml容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉移到容量瓶中，輕輕搖動，用玻璃棒引流，加水定容至100ml，室温密閉存放。×SSC(1L)洗液配製：

.加入800ml去離子水加熱溶解。

.待溶液冷卻至室温，加入數滴1mol/LHCl調pH至7.0-7.2。

.把溶液轉移到經檢查過的1L容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉移到容量瓶中，輕輕搖動，用玻璃棒引流，加水定容至1L，室温密閉存放。

×SSC(1L)洗液配製：

.量取10ml20×SSC與10ml10%SDS於1L的燒杯中。.加入800ml去離子水加熱溶解。

.待溶液冷卻至室温，加入數滴1mol/LHCl調pH至7.0-7.2。

.把溶液轉移到經檢查過的1L容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉移到容量瓶中，輕輕搖動，用玻璃棒引流，加水定容至1L，室温密閉存放。

(10×)配製：

4.3.1.在乾燥環境中用電子天平精密稱取適量的EDC粉末於離心管中。4.3.2.按EDC(mg)：滅菌水(ml)=1：5的`比例向裝有EDC粉末的離心管中精確加入滅菌水。

4.3.3.將裝有EDC粉末和滅菌水的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻，然後於離心機上離心，室温放置(現用現配)。

(2×)配製：

4.4.1.方法一：

.用適當規格的移液槍按以下體系依次準確移取試劑於離心管中。

20×SSC10%SDSFormamide

10mg/mlSalmonDNA滅菌水

2.5ml200μl5ml100ul2.2ml

.將裝有樣品的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻，然後於離心機上離心。

.於無菌操作枱分裝HB至1.5ml離心管中，-20℃保存備用。4.4.2.方法二：

.在乾燥環境下用電子天平精確稱取0.8765gNaCl和0.441g檸檬酸三鈉·2H2O於10ml燒杯中，加入不超過5ml(約3ml)滅菌水，用玻璃棒攪拌，待溶解後調節PH至7.0。

.在乾燥環境下用電子天平精確稱取0.02gSDS和0.001g鮭魚精DNA於燒杯中。

.用1000ul移液槍準確移取5mlFormimade於燒杯中，玻璃棒攪拌均勻。.將燒杯中的液體轉移至10ml容量瓶，用少量滅菌水洗滌燒杯和玻璃棒2~3次，洗滌液也轉移至容量瓶中，輕輕搖動，用玻璃棒引流，加滅菌水定容至10ml。

.於無菌操作枱分裝HB至1.5ml離心管中，-20℃保存備用。

4.5.模板點樣液配製

4.5.1.按以下體系移取試劑於離心管中。

EDCMESDNA(100μM)H2OTotal

1μl5μl1μl3μl10μl

DNA終濃度10μM。

4.5.2.將裝有樣品的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻，然後於離心機上離心，室温放置待用。

生物試劑篇三：常用生物試劑配製方法

常用生物試劑配製方法（buffer）

實驗室各種緩衝液的配方

電泳緩衝液

50×Tris-乙酸（TAE）緩衝液終濃度配製1L溶液

成分各成分的用量

2mol/LTris鹼242g

1mol/L冰乙酸57.1ml

EDTA（pH＝8.0）18.622g（200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0））水補足1L

5×Tris-硼酸（TBE）緩衝液

成分及終濃度配製1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris鹼54g

445mmol/L硼酸鹽27.5g硼酸

10mmol/LEDTA20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）水補足1L

染料

1％溴酚藍（bromophenolblue）

加1g水溶性鈉型溴酚藍於100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

溶解1g二甲苯青FF於足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙錠（ethidiumbromide）

小心稱取1g溴化乙錠，轉移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，於4℃貯存。

凝膠上樣液（gelloadingsolutions）

6×鹼性凝膠上樣液（室温貯存）

成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

0.3N氫氧化鈉300ul10N氫氧化鈉6mmol/LEDTA120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

18％聚蔗糖（400型）1.8g

0.15％溴甲酚綠15mg

0.25％二甲苯青FF25mg

水補足到10ml

6×聚蔗糖凝膠上樣液（室温貯存）

成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚藍1.5ml1％溴酚藍

0.15％二甲苯青FF1.5ml1％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

15％聚蔗糖（400型）1.5g

水補足到10ml

6×溴酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室温貯存）

成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚藍2.5ml1％溴酚藍

0.25％二甲苯青FF2.5ml1％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）1.5g

水補足到10ml

6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）

成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚藍1.5ml1％溴酚藍

0.15％二甲苯青FF1.5ml1％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

50％甘油3ml

水3.9ml

6×蔗糖凝膠上樣液（室温貯存）

成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚藍1.5ml1％溴酚藍

0.15％二甲苯青FF1.5ml1％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

40％聚蔗糖4g

水補足到10ml

10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室温貯存）

成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量

0.2％溴酚藍20mg

0.2％二甲苯青FF20mg

200mmol/LEDTA4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)

0.1％SDS100ul10％SDS

50％甘油5ml

水補足到10ml

0.5mol/LEDTA:配製等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合後形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH(調節pH＝8.0)，並溶於水中，定容至1L。

0.5mol/LEDTA:配製等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合後形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH，並溶於水中，定容至1L。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2"6H2O於足量的水中，定容到100ml。

10mg/mlRnase（無DNase）（DNase－freeRNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶於

1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH5.0）。溶解後於水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調pH至7.5，於-20℃貯存。（配製過程中要戴手套）

10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒於約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解後用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

10×標準DNA連接酶緩衝液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度配製10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L貯液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L貯液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L貯液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L貯液,5mmol/L鹽酸亞精胺（可選）:50ul1mmol/L貯液,0.5mg/mlBSA（組分V）（可選）:0.5ml10mg/mL貯液,水:2.25ml將配製好的緩衝液分裝成小份，貯存於-20℃。

DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水

加100ulDEPC於100ml水中，使DEPC的體積分數為0.1％。在37℃温浴至少12h，然後在15psi條件下高壓滅菌20min，以使殘餘的DEPC失活。DEPC會與胺起反應，不可用DEPC處理Tris緩衝液。

TE（用於懸浮和貯存DNA）

成分及終濃度配製100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4(轉載於:mol/LEDTA200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

水98.8ml

Tris緩衝液（Tris-HClbuffer）

將121g的Tris鹼溶解於約0.9L水中，再根據所要求的pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調整終體積至1L。

濃鹽酸的體積（ml）pH

8.69.0

148.8

218.6

28.58.4

388.2

468.0

567.8

667.6

71.37.4

767.2