兔兒傘不同溶劑提取物抗自由基的效果實驗分析

　　1 材料與儀器

1.1 材料

兔兒傘由安徽師範大學張中信老師於2007-06採自安徽黃山，經安徽師範大學張小平教授鑑定為兔兒傘Syneilesis aconitifolia （Bunge） Maxim.。

1.2 儀器與試劑

WF-4000微波快速反應系統（上海屹堯分析儀器有限公司）；UV1900PPC紫外可見分光光度計（上海亞研電子科技有限公司）；電子天平（北京賽多利斯天平儀器廠）。所有試劑均為分析純。

　　2 方法

2.1 兔兒傘不同溶劑提取物製備將一定量的兔兒傘乾燥粉末置於微波反應釜中，分別以水、乙醇、丙酮、醋酸乙酯為溶劑，料液比為1∶60，微波功率800 W，提取3次，15 min/次，合併提取液，減壓濃縮，真空乾燥備用。

2.2 羥自由基（·OH）的清除能力採用亞鐵離子催化H2O2產生·OH（Fonton反應）的方法［10，11］。取0.75 mol/L鄰二氮菲溶液l ml，PBS液2 ml和蒸餾水1 ml，充分混勻後，加0.75 mmol/L硫酸亞鐵I ml，混勻，加0.01%的H2O2 l ml，37℃水浴60 min，以PBS液調零，536 nm處測定吸光度，其值記為AP；用l ml蒸餾水代替l ml H2O2，以PBS調零，測得吸光度記為AB；用1 ml試樣代替1 ml蒸餾水，以同濃度不加H2O2 的加試樣管調零，測得吸光度記為As。·OH清除率（d%）計算公式： d（%）=（As-AP）/（AB-Ap）×100%。

2.3 超氧陰離子自由基（O2- ·）清除能力取0.05 mol/L pH 8.2的Tris一HCl緩衝液4.5 mol於試管中，置25℃水浴預熱20 min，加入供試樣品0.1ml，2.5 mmol/L鄰苯三酚0.4 ml，混勻後在25℃水浴反應4 min加8 mmol/L鹽酸兩滴終止反應，（299±1）nm處測定吸光度，空白組以0.1 ml蒸餾水代替供試樣品，並按下式計算清除率［12］。d%= （A空白-A樣品）/A空白×100%。

　　3 結果

不同溶劑提取物對羥自由基的清除作用

兔兒傘不同溶劑提取物對·OH的清除作用如圖1所示。乙醇提取物對羥自由基清除率的迴歸方程是： Y= 1.576 79+ 13.629 04X（R= 0.996 69）， 丙酮提取物對羥自由基清除率的迴歸方程是：Y=0.43101 + 9.935 53X（R= 0.999 8），水提取物對羥自由基清除率的.迴歸方程是Y=0.007+5.033 5X（R=0.997 36），醋酸乙酯提取物對羥自由基清除率的迴歸方程是Y= 6.729+5.614 5X（R=0.969 9），由迴歸方程可求出兔兒傘的乙醇、丙酮、水、醋酸乙酯提取物對·OH清除率為50%時的提取物濃度（IC50）分別為：3.55，4.99，9.93，7.70 mg/ml 。由此可見，4種溶劑提取物對羥自由基均有一定的清除作用，其中乙醇提取物對羥自由基的清除效果最好。